In situ Markierung von Krankheitsproteinen in embryonalen Stammzellen mit Genfallen-induzierten Mehrzweckallelen

Leitung:		Prof. Dr. Harald von Melchner
Institut:		Molekulare Hämatologie, Goethe Universität Frankfurt
Homepage:		www.vonmelchner.de

Dieses Teilprojekt dient der Entwicklung von Technologien zur N-terminalen Markierung von Proteinen deren Gene in embryonalen Stammzellen der Maus ("embryonic stem cells", ESCs) durch konditionale Genfallenvektoren inaktiviert wurden. Diese Vektoren inserieren spezifische Rekombinase-Zielsequenzen zusammen mit einer Genfallenkassette in das ESC-Genom, wodurch Mehrzweckallele generiert werden, die postinsertionalen Modifika-tionen durch Rekombinase vermittelten Kassettenaustausch ("recombinase mediated cas-sette exchange", RMCE) zugänglich sind. Im Rahmen dieses Teilprojektes werden vom Konsortium Genfallenintegrationen in krankheitsrelevanten Genen für den Austausch der Genfalle mit generischen Markerepitopen ausgewählt. Die ausgetauschten ESC Linien, die markierte Proteine unter der Kontrolle ihrer endogenen Promotoren exprimieren, werden einer in vivo Bilderfassung und -auswertung ("live cell imaging") sowie einer massenspektro-metrischen Interaktomanalyse zugeführt.



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