Zellspezifischer Decoy Oligodesoxynukleotid-Transfer ins insuffiziente Herz

Leitung:		Prof. Dr. med. Oliver Müller / Prof. Dr. Raffi Bekeredjian
Institut:		Abt. Innere Medizin III, Universitätsklinikum Heidelberg
Homepage:		www.klinikum.uni-heidelberg.de/Labor-Mueller

Ziel von Teilprojekt 3 war die Etablierung eines effizienten und zellspezifischen Transfersystems, um in vivo systemisch applizierte Decoy-ODN primär in das Herzmuskelgewebe einzuschleusen. Hierzu wurden modifizierte AAV-Kapside auf Basis des kardiotropen Serotyps 9 als Shuttle entwickelt, bei denen ein Viertel der Kapsidproteine so verändert waren, dass die Nukleinsäuren an die Virusoberfläche gebunden werden können. Diese chimären Virus-Partikel sind prinzipiell zur Transduktion von Kardiomyozyten in vivo geeignet, wie die Expression eines für das Red Fluorescent Protein kodierenden Reporterplasmids zeigte. Allerdings drangen nur etwa 10% der an die Viruspartikel gebundenen Plasmid-DNA in vitro in eukaryotische Zellen ein. In einem in vivo-Ansatz (in der Maus) konnte gezeigt werden, dass bei einem Mischungsverhältnis Verhältnis von 1:3 von speziell modifizierten zu Wildtyp-Kapsid-Untereinheiten die Transduktionseffizienz der AAV9-Vektoren lediglich um etwa 50% abnimmt, die kardiale Spezifität aber erhalten bleibt. Obwohl dieser Ansatz grundsätzlich als Strategie für einen in vivo-Gentransfer geeignet ist, erwies sich der zellspezifische Transfer der Decoy-ODN in vivo dennoch als zu ineffizient, sodass im Verlauf des Projekts die Sonoporation, bei der in der medizinischen Diagnostik etablierte Mikrobläschen, die mit den zu applizierenden DNA-Konstrukten beladen sind, mittels Ultraschall am Zielort zerstört werden und ihre Ladung an die umgebenden Zellen abgeben, weiter entwickelt wurde.